Ley de Lambert-Beer

Se trata de una Ley muy familiar en  Espectroscopía, y con la que nos hemos de familiarizar. Relaciona la concentración de un constituyente con la cantidad de energía absorbida por la muestra:

A_λ = ε_λ . b. C

Siendo:          

A_λ ….Absorción de la muestra a una determinada longitud de onda.

ε_λ …..Coeficiente de absortividad a una determinada longitud de onda.

b……..Paso óptico de la cubeta en la que está la muestra.

C….. ..Concentración en la muestra de un determinado analito.

La absorción nos la da el espectrofotometro, el paso óptico es constante y debe de configurarse para que la calibración sea lineal y no se produzca saturación, la concentración se analizará durante la calibración por los métodos de referencia, y nos queda por determinar el coeficiente de absortividad, que depende del constituyente y de la longitud de onda, el principal problema radica en conocer esta constante.
Podemos deducir que:
A_λ = K_λ . C
Siendo K una constante (ε_λ . b).

Esta será la base para futuras entradas para hablar de tipos de regresión tales como: LS, CLS o ILS.

Una simple muestra nos sería suficiente para calcular ε_λ y después aplicar la fórmula:

C = A_λ : K_λ

Para predecir los desconocidos. Obviamente esta no es la mejor alternativa.

Otra opción mejor pasa por hacer una recta de calibrado con varias muestras de diferentes concentraciones y desarrollar  una simple calibración de Absorbancia respecto a Concentración calculando la pendiente e intercepto,con ella podemos predecir muestras de rutina basándonos en la absorbancia obtenida  en el espectrofotómetro (Least Square Regression_LS).

Las regresiones del tipo LS, no sirven cuando hay varios constituyentes y sus bandas interfieren entre sí, ya que se asume que el pico de absorción o el área de la banda de absorción son debidas únicamente al constituyente de interés, por tanto es uno de los problemas que claramente tenemos en las regresiones para los espectros NIR, donde dada la gran anchura de las bandas de absorción, las interferencias entre bandas son mucho más complejas.